高效液相色谱仪的进样系统

高效液相色谱仪的进样系统
进样阀是保证色谱分析准确度的重要部件。　
　　作用：将待分析样品引入色谱柱 
　　要求：耐高压、重复性好、死体积小、保证中心进样、与溶剂接触部分有很好的耐腐蚀性、进样时对色谱柱系统流量波动要小、便于实现自动化

进样方式：注射器进样、六通阀进样、停留进样

1注射器进样
　　方法：用高压注射器吸入少量样品，穿过隔垫后送入色谱柱头
　　优点：较高柱效，价格便宜，结构简单
　　缺点：只能在低压或停留状态使用，易漏液且重现性差


2六通阀进样
　　目前，大多数高效液相色谱仪配置罗达因（Rheodyne）六通手动进样阀。下图即为罗达因7125 进样阀，有二个位置，第1 个是取样，第二个是进样。备有固定体积的进样环管，根据需要可以更换不同的固定体积环管，例如，分析用的进样环管，体积在0.5～100μl之间。对于制备用的进样环管，可由0.1～5μl。

　　进样阀的内部通道是很微细的，所以，样品液中决不应该带有固体微粒，以免堵塞通道。同理，样品液的浓度不宜太高，免使其在进样阀内结晶析出。应当经常清洁进样阀的通道，此时应放在“进样”位置，使得冲洗液自＃5 孔流出。至于样品环管则无需清洁，因为流动相自动地不断流过清洗。
　　六通阀处于取样位置时，载气经1，2两通道直接进入色谱柱，无样品进入色谱仪，气体样品经通道5流入接在通道3，6上的定量管7中，经通道4流出，使定量管充满样品。



　　把六通阀从取样位置旋转60°后到进样位置，流动相经1，6通道进入定量管，把定量管中的样品经3，2两通道带到色谱柱中，实现了定体积进样，定量管的体积可根据需要进行调解。


3停留进样
　　方法：进样前切断流动相，待柱顶卸压后，立即注入样品，再接通流动相
　　优点：无泄露现象
　　缺点：无法取得精确保留时间，重复性差


自动进样器：
　　大量的样品分析必须使用自动进样器，例如，药物的评价测试和药物代谢动力学研究等要求分析大批样品。
下图为岛津LC-6A 高效液相色谱仪配置的SIL-6A 自动进样器示意图，由色谱仪微机控制其动作。



　　对于小于20μl进样体积（任意可调）的动作步骤如下。
　　a ．采样针头插入冲洗孔，由冲洗泵冲洗整个流路。
　　b ．提升采样针头并移至样品瓶上方（此时采样针头内预留一个约3μl的空气间隙），由注射器动作吸液。
　　c ．针头插入样品瓶，吸走指定体积的样品液并且多吸7μl。
　　d ．当针头移开样品瓶时，再次吸入一段空气间隙，此时采样针头已经抵达六通阀进样口上方。
　　e ．六通阀反时针方向切换，指定体积的样品液进入样品环管。
　　f ．六通阀顺时针方向切换至原来位置，流动相进入样品环管，随即把样品液导入色谱柱。
　　9 ．注射器内多余的液体经三通阀排走。然后采样针头再次插入冲洗孔，冲洗泵冲洗流路。
　　h ．完成上述动作后，采样针头回到冲洗孔上方，停住。等待下一次分析指令。
　　大于20μl样品液的进样，除了更换进样环管外，还要通过微机控制键盘改换动作步骤。高效液相色谱仪配备微机控制的自动进样器和积分仪可连续地日夜运转，处理几十、乃至几百个样品，大大提高仪器的工效。